MLO-Y4 MLOY4 (小鼠骨样细胞)操作步骤

在完成MLO-Y4细胞的复苏和传代后，接下来的实验操作需严格遵循无菌原则，以确保细胞的稳定性和实验结果的可靠性。

1. 细胞接种与培养：

将传代后的MLO-Y4细胞以适当密度（通常为5×10⁴ cells/cm²）接种于预涂胶原的培养皿中，加入含10%胎牛血清（FBS）和1%α-MEM培养基，置于37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养。每隔48小时更换新鲜培养基，避免代谢废物积累影响细胞状态。

2. 细胞形态观察：

MLO-Y4细胞在健康状态下呈星形或多突触状，若发现细胞变圆或脱落增多，可能提示培养条件异常（如pH失衡或污染）。此时需及时调整培养基或重新检测无菌环境。

3. 实验干预处理：

根据研究目的，可对细胞施加力学刺激（如流体剪切力）、化学诱导或基因转染。例如，在研究成骨分化时，可添加50 μg/mL抗坏血酸，连续培养14天后通过碱性磷酸酶（ALP）染色评估分化效果。

4. 数据收集与分析：

通过CCK-8检测增殖活性，或采用qPCR、Western blot检测成骨相关基因（如Runx2、OCN）的表达。若需观察细胞间通讯，可进行钙成像或缝隙连接功能实验。

注意事项：

- 胶原包被能显著增强细胞贴壁率，建议提前24小时以0.1 mg/mL胶原溶液处理培养皿。

- 避免频繁晃动培养瓶，以防细胞突触损伤。

- 冻存时使用含10% DMSO的冻存液，程序降温后转入液氮长期保存。

通过上述步骤，可确保MLO-Y4细胞在实验中保持最佳状态，为骨代谢机制研究提供可靠模型。后续实验可进一步结合共培养体系或体内移植，拓展其在骨组织工程中的应用。